1、前言
藥品檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室通常包含理化實(shí)驗(yàn)室和微生物實(shí)驗(yàn)室兩部分；理化實(shí)驗(yàn)室運(yùn)用物理、化學(xué)的方法對(duì)生產(chǎn)用的原輔料、包裝材料、中間體及成品等進(jìn)行鑒別、含量測(cè)定等分析和檢驗(yàn)，其結(jié)果作為檢品是否符合法定要求和企業(yè)內(nèi)部質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的依據(jù)。
微生物實(shí)驗(yàn)室一般具有以下功能：
①按《中國(guó)藥典》[1]要求，進(jìn)行微生物檢驗(yàn)方法的驗(yàn)證、無(wú)菌檢查、微生物限度檢查、抗生素效價(jià)的微生物檢定、青霉素酶及其活力測(cè)定。
②按現(xiàn)行《藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范》的要求，對(duì)醫(yī)藥工業(yè)潔凈室的潔凈度進(jìn)行微生物測(cè)定，對(duì)無(wú)菌生產(chǎn)區(qū)環(huán)境日常動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)以及生產(chǎn)過(guò)程中其他需要進(jìn)行微生物檢測(cè)的地方，如對(duì)無(wú)菌過(guò)濾器的驗(yàn)證、環(huán)境及設(shè)備消毒效果的驗(yàn)證、滅菌效果的驗(yàn)證、無(wú)菌藥品包裝密封性驗(yàn)證中微生物挑戰(zhàn)性試驗(yàn)等。
③細(xì)菌內(nèi)毒素檢查、注射劑的不溶性微粒檢查，這類(lèi)檢查雖不是檢查微生物，但它們對(duì)檢查環(huán)境有較高的要求，通常設(shè)在微生物實(shí)驗(yàn)室。
2、微生物實(shí)驗(yàn)室設(shè)計(jì)的有關(guān)要求
《藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范》[2]要求藥品生產(chǎn)企業(yè)應(yīng)負(fù)責(zé)藥品生產(chǎn)全過(guò)程的質(zhì)量管理和檢驗(yàn)，并配備與藥品生產(chǎn)規(guī)模、品種、檢驗(yàn)要求相適應(yīng)的人員、場(chǎng)所、儀器、設(shè)備。在進(jìn)行微生物實(shí)驗(yàn)室的設(shè)計(jì)時(shí)，應(yīng)了解檢驗(yàn)流程、過(guò)程性質(zhì)、有關(guān)標(biāo)準(zhǔn)規(guī)范的規(guī)定等，結(jié)合藥品生產(chǎn)企業(yè)生產(chǎn)品種、檢驗(yàn)工作量的大小合理布置相應(yīng)的微生物檢驗(yàn)功能間。
在藥品的微生物學(xué)檢驗(yàn)中，為了保證檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確、可靠，針對(duì)微生物學(xué)檢驗(yàn)產(chǎn)生影響的幾種因素需要采取相應(yīng)的措施，通常為以下幾種：
①藥品本身的抑菌性或藥品中防腐劑的抑菌性。它們會(huì)掩蓋無(wú)菌藥品已受污染的事實(shí)或造成低于實(shí)際污染水平的菌檢結(jié)果。通常采用生長(zhǎng)比較法，在實(shí)際檢驗(yàn)條件下，通過(guò)比較對(duì)照接種試驗(yàn)菌或陽(yáng)性菌在有無(wú)供試品的狀態(tài)下的生長(zhǎng)情況，來(lái)驗(yàn)證供試品在該檢驗(yàn)方法下的抑菌性。
②標(biāo)準(zhǔn)菌種（試驗(yàn)菌或陽(yáng)性菌）制備與傳代、種類(lèi)及生長(zhǎng)狀態(tài)需符合現(xiàn)行《中國(guó)藥典》要求。
③培養(yǎng)基的促菌生長(zhǎng)能力：培養(yǎng)基應(yīng)具備廣譜性，有助于檢品中所有存活微生物的生長(zhǎng)。通過(guò)接種不同試驗(yàn)菌并觀(guān)察它們的生長(zhǎng)狀態(tài)，進(jìn)行培養(yǎng)基靈敏度驗(yàn)證試驗(yàn)。
④檢驗(yàn)器具，如過(guò)濾系統(tǒng)的濾器、濾膜性質(zhì)、材質(zhì)等性能，淋洗液、稀釋劑、培養(yǎng)基的無(wú)菌性及操作程序等，通常進(jìn)行陰性對(duì)照試驗(yàn)來(lái)檢驗(yàn)其影響。
⑤培養(yǎng)條件（溫度、濕度及需氧或厭氧）及檢測(cè)環(huán)境應(yīng)符合相關(guān)要求。
2.1無(wú)菌檢查實(shí)驗(yàn)室
2.1.1用途
用于檢查藥典要求無(wú)菌的藥品、醫(yī)療器具、原料、輔料及其他品種是否無(wú)菌。
2.1.2《中國(guó)藥典》對(duì)無(wú)菌檢查實(shí)驗(yàn)室要求
無(wú)菌檢查應(yīng)在環(huán)境潔凈度10 000級(jí)下的局部潔凈度100級(jí)的單向流空氣區(qū)域內(nèi)或隔離系統(tǒng)中進(jìn)行，其全過(guò)程必須嚴(yán)格遵守?zé)o菌操作，防止微生物污染。單向流空氣區(qū)、工作臺(tái)面及環(huán)境應(yīng)定期按《醫(yī)藥工業(yè)潔凈室（區(qū)）懸浮粒子、浮游菌和沉降菌的測(cè)試方法》的現(xiàn)行國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行潔凈度驗(yàn)證。隔離系統(tǒng)按相關(guān)的要求進(jìn)行驗(yàn)證，其內(nèi)部環(huán)境的潔凈度須符合無(wú)菌檢查的要求。
2.2微生物限度檢查實(shí)驗(yàn)室
2.2.1用途
用于檢查非規(guī)定滅菌制劑及其原料、輔料受微生物污染的程度。檢查項(xiàng)目包括細(xì)菌數(shù)、霉菌數(shù)、酵母菌數(shù)及控制菌檢查。
2.2.2《中國(guó)藥典》
對(duì)微生物限度檢查實(shí)驗(yàn)室的要求
微生物限度檢查應(yīng)在環(huán)境潔凈度10 000級(jí)下的局部潔凈度100級(jí)的單向流空氣區(qū)域內(nèi)進(jìn)行。檢驗(yàn)全過(guò)程必須嚴(yán)格遵守?zé)o菌操作，防止再污染。單向流空氣區(qū)域、工作臺(tái)面及環(huán)境應(yīng)定期按《醫(yī)藥工業(yè)潔凈室（區(qū)）懸浮粒子、浮游菌和沉降菌的測(cè)試方法》的現(xiàn)行國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行潔凈度驗(yàn)證。
2.3抗生素效價(jià)的微生物檢定室
2.3.1用途
在適宜條件下，根據(jù)量反應(yīng)平行線(xiàn)原理設(shè)計(jì)，通過(guò)檢測(cè)抗生素對(duì)微生物的抑制作用，計(jì)算抗生素活性（效價(jià)）。
2.3.2《中國(guó)藥典》[1]對(duì)抗生素效價(jià)的微生物檢定室的環(huán)境潔凈度未有明確規(guī)定要求
在國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理局2000年9月頒發(fā)的《藥品檢驗(yàn)所實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量管理規(guī)范（試行）》中第十八條中規(guī)定有“抗生素微生物檢定實(shí)驗(yàn)室分為半無(wú)菌操作間和緩沖間。半無(wú)菌操作間設(shè)有紫外線(xiàn)燈，操作臺(tái)宜穩(wěn)固，并保持水平。實(shí)驗(yàn)室內(nèi)應(yīng)光線(xiàn)明亮，并有控制溫度、濕度的設(shè)備”。通常按潔凈度100 000級(jí)設(shè)計(jì)。
抗生素效價(jià)的微生物檢定實(shí)驗(yàn)所用燒杯、漏斗、移液管、容量瓶、滴管、小鋼管等器皿應(yīng)與其他器皿分開(kāi)洗滌，檢定用平板與其他培養(yǎng)基平板也應(yīng)分開(kāi)洗滌，防止抗生素對(duì)其他微生物培養(yǎng)的污染。
2.4細(xì)菌內(nèi)毒素檢查用室
2.4.1用途
利用鱟試劑來(lái)檢測(cè)或量化由革蘭陰性菌產(chǎn)生的細(xì)菌內(nèi)毒素，以判斷供試品中細(xì)菌內(nèi)毒素的*是否符合規(guī)定。適用于某些不能用家兔進(jìn)行熱原檢測(cè)的品種，如放射性藥劑腫瘤抑制劑等，因?yàn)檫@些制劑具有細(xì)胞毒性而有一定的生物效應(yīng)。目前一般認(rèn)為特別適用于生產(chǎn)過(guò)程中的熱原控制，因?yàn)樵摍z查法操作簡(jiǎn)單，實(shí)驗(yàn)費(fèi)用少，結(jié)果迅速可得。但該檢查法對(duì)革蘭陰性菌以外的內(nèi)毒素不夠敏感，故尚不能代替家兔熱原法。
2.4.2《中國(guó)藥典》中要求
進(jìn)行細(xì)菌內(nèi)毒素含量測(cè)定試驗(yàn)所用的器皿需經(jīng)處理，以去除可能存在的外源性?xún)?nèi)毒素，試驗(yàn)操作過(guò)程應(yīng)防止微生物的污染，在清凈環(huán)境中進(jìn)行，在層流工作臺(tái)內(nèi)操作。實(shí)驗(yàn)前，須用肥皂洗手，用75%乙醇（用叔丁醇代替乙醇）棉球消毒。但《中國(guó)藥典》中未對(duì)細(xì)菌內(nèi)毒素檢查用室的環(huán)境潔凈度明確規(guī)定要求。一般來(lái)說(shuō)細(xì)菌內(nèi)毒素檢查用室為半無(wú)菌操作間：室內(nèi)設(shè)滅菌紫外燈，潔凈度要求一般為100000級(jí)。也有一些藥廠(chǎng)為了節(jié)省能耗而將其設(shè)置為一般環(huán)境。
2.5不溶性微粒檢查用室
2.5.1用途
在可見(jiàn)異物檢查符合規(guī)定后，用以檢查溶液型靜脈用注射劑中不溶性微粒的大小和數(shù)量。
2.5.2《中國(guó)藥典》[1]要求
試驗(yàn)操作環(huán)境應(yīng)不得引入微粒，測(cè)定前的操作應(yīng)在層流凈化臺(tái)下進(jìn)行。玻璃儀器和其他所需的用品應(yīng)潔凈無(wú)微粒，本法所用微粒檢查用水（或溶劑）使用前須經(jīng)不大于1.0 um的微孔濾膜濾過(guò)。
2.5.3因《中國(guó)藥典》要求注射用水須進(jìn)行細(xì)菌內(nèi)毒素檢測(cè)，因此溶液型靜脈用注射劑的不溶性微粒檢查可與細(xì)菌內(nèi)毒素檢查用室設(shè)成一間，不用專(zhuān)設(shè)一室，配置相應(yīng)的層流凈化臺(tái)。
3、相關(guān)問(wèn)題及案例
3.1陽(yáng)性接種室
（1）微生物檢驗(yàn)離不開(kāi)對(duì)標(biāo)準(zhǔn)菌種及所檢測(cè)的菌種進(jìn)行各種處理，如培養(yǎng)基的靈敏度檢查、無(wú)菌檢查及微生物限度檢查方法的驗(yàn)證、陽(yáng)性對(duì)照、抗生素效價(jià)的微生物檢定時(shí)菌種及菌懸液制備、轉(zhuǎn)接種等，這些活動(dòng)要直接處理微生物菌種，在一定條件下，許多種類(lèi)都是病原菌，因此有關(guān)微生物暴露性操作活動(dòng)盡可能在生物安全柜內(nèi)進(jìn)行。所有染菌物品、培養(yǎng)物均應(yīng)經(jīng)高壓滅菌處理后再清洗。
（2）無(wú)菌檢查及微生物限度檢查中陽(yáng)性對(duì)照菌液加入含供試品的培養(yǎng)基的操作，不能在檢測(cè)供試品的無(wú)菌室或凈化臺(tái)上進(jìn)行，以免污染供試品及操作環(huán)境?？稍O(shè)置一間陽(yáng)性接種室進(jìn)行上述操作。以前有的將其設(shè)置為一般環(huán)境；有的根本就未專(zhuān)設(shè)此室?！吨袊?guó)藥典》（2005年版）頒發(fā)后，目前許多人認(rèn)為將其設(shè)置為潔凈度10 000級(jí)，設(shè)置單獨(dú)的人凈、物凈系統(tǒng)。
3.2無(wú)菌室
《中國(guó)藥典》要求無(wú)菌藥品的無(wú)菌性檢查室、非無(wú)菌藥品的微生物限度檢查室的環(huán)境潔凈度都為10 000級(jí)（局部潔凈度100級(jí)），通常都稱(chēng)為無(wú)菌室；若某藥廠(chǎng)既生產(chǎn)無(wú)菌藥品，也生產(chǎn)非無(wú)菌藥品，為防止非無(wú)菌藥品供試品對(duì)無(wú)菌藥品的無(wú)菌性檢查的污染，有兩種方式：
①如果同時(shí)進(jìn)行這兩類(lèi)藥品的檢驗(yàn)，將這兩種無(wú)菌室分開(kāi)設(shè)置二套，使用各自的人凈、物凈系統(tǒng)。此種方式無(wú)菌室利用率不高。
②通常只設(shè)一套無(wú)菌室，分期進(jìn)行這兩類(lèi)藥品的檢驗(yàn)，合理安排檢驗(yàn)規(guī)程、嚴(yán)格操作并經(jīng)驗(yàn)證，確保不對(duì)無(wú)菌藥品的無(wú)菌性檢查產(chǎn)生污染。
3.3隔離系統(tǒng)
《中國(guó)藥典》[1]無(wú)菌檢查法中被為可使用的設(shè)施，它能提供并保持與外界環(huán)境隔離的百級(jí)潔凈度的操作環(huán)境。隔離操作器所處環(huán)境的級(jí)別取決于它們的設(shè)計(jì)及其應(yīng)用。美國(guó)藥典并不要求它安裝在潔凈區(qū)/室，但應(yīng)控制無(wú)關(guān)人員進(jìn)入其所處房間；歐盟GMP則建議應(yīng)將它放置于100 000級(jí)的環(huán)境中。采用隔離操作技術(shù)能zui大限度降低操作人員和外界環(huán)境對(duì)潔凈空間的影響。它既可用于無(wú)菌實(shí)驗(yàn)，又可用于其他需要高潔凈度的多種研究和實(shí)驗(yàn)。但隔離操作器的性能與操作程序的驗(yàn)證尤為重要，隔離用袖管/手套系統(tǒng)應(yīng)進(jìn)行常規(guī)監(jiān)測(cè)，這包括經(jīng)常進(jìn)行必要的檢漏試驗(yàn)。隔離系統(tǒng)的諸多優(yōu)勢(shì)如潔凈區(qū)域的隔離化、自動(dòng)化、小型化等將使其成為無(wú)菌區(qū)的發(fā)展未來(lái)。
3.4培養(yǎng)室
用來(lái)放置培養(yǎng)各類(lèi)微生物生長(zhǎng)的細(xì)菌培養(yǎng)箱和真菌培養(yǎng)箱。大多數(shù)將其設(shè)置為一般環(huán)境；也有的將其潔凈度設(shè)置為100 000級(jí)。設(shè)計(jì)時(shí)根據(jù)藥廠(chǎng)相關(guān)部門(mén)的要求進(jìn)行。